艾滋病檢測方法及優缺點
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艾滋病毒檢測方法有很多種,蒐集的檢測方法介紹如下:
一、HIV病毒分離
常用方法:用活細胞、組織、胚胎或動物分離病毒。
細胞培養分離病毒主要過程:細胞培養,病毒分離和病毒鑑定。
基本原理:病毒在活的敏感細胞、組織、胚胎或動物體內複製繁殖。
意義:從病變部位(活檢組織、腦脊液、皰疹液、體腔積液)或血液中分離到病毒的診斷意義很大。從糞便中分離到病毒(如鉅細胞病毒,腸道病毒等)的意義應結合其它病毒學檢查結果(如抗病毒抗體等)來判定。
HIV病毒分離檢測方法評價:優點:是診斷病毒性疾病的金標準,特異性強,能發現新病毒,反應傳染性,可在試驗動物中驗證。
缺點:耗時長,一般只能做回顧性診斷,成本和技術要求高,敏戌性不高,有些病毒無法或極難培養,不同的病毒需要不同的分離方法。
發展方向:短時細胞培養加免疫熒光或免疫酶染色法快速檢測病毒抗原。
二、電子顯微鏡直接檢查HIV病毒
常用方法:普通電子顯微鏡檢查,免疫電子顯微鏡檢查。
基本原理:標本經負染處理後,根據病毒顆粒的形態作出判斷。
意義:能根據病毒顆粒的形態診斷,如輪狀病毒、腺病毒、甲型肝炎病毒、星狀病毒等。
電子顯微鏡直接檢測技術的評價:優點:可直接檢測標本;能發現新病毒;能直觀地顯示組織或細胞內的病毒。可用於檢測極難分離的病毒。
缺點:機器價格昂貴,技術要求高,不太適用於常規病毒學診斷試驗或大量標本的檢測;病毒量較大時才易得到陽性結果,應用範圍有限,且不能鑑別病毒的血清型。#p#副標題#e#
三、檢測HIV病毒的抗原成分
常用方法:對組織或細胞內的病毒成分可用免疫熒光染色、免疫酶染色等;對細胞外的或可溶性的病毒成分可用方法有:凝集試驗、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、放射免疫、免疫滲濾層析試驗(膠體金)等。
基本原理:抗病毒抗體致敏的血球或吸附抗病毒抗體的載體顆粒與病毒結合; 病毒抗原和抗體在凝膠中相遇形成沉澱線; 標記的抗病毒抗體與相應的病毒抗原結合或反應,通過某種指示系統顯示病毒抗原的存在。
意義:對大多數病毒而言,病毒抗原陽性一般可作爲診斷急性病毒感染的依據。但對有些病毒(如鉅細胞病毒,受滋病毒,乙肝病毒),病毒抗原陽性常不能說明宿主的感染狀態,如急性、慢性或攜帶狀態。該方法能用於早期快速診斷病毒感染,特別適用於臨牀。
四、病毒血清學(HIV抗體檢測)
常用方法:中和試驗、補體結合試驗、血凝抑制試驗、免疫熒光、免疫酶染色、ELISA、化學發光、時間分辨免疫熒光、熒光偏振、膠體金。
基本原理:抗原和抗體特異性地結合或反應,通過某種指示系統顯示病毒抗體的存在。
意義:恢復期血清中抗病毒抗體滴度≥4倍升高有診斷意義; 血清抗病毒IgM抗體陽性可作爲診斷該病毒近期感染的依據。
HIV抗體檢測化學發光法評價:優點:正常用免疫學方法中最敏感,判斷結果較客觀,可自動化,一次可檢測大量標本。缺點:多爲進口產品,試劑和儀器較貴。
HIV抗體檢測ELISA法評價:
優點:可用機器判讀結果,便於自動化和一次性檢測大量標本,檢測病毒抗體的敏感性比免疫熒光法或免疫酶法高。
缺點:檢測抗原時,與免疫熒光法相比,敏感性較低,一般只能檢測可溶性病毒抗原。
發展方向:重組抗原,捕獲法。
IV抗體檢測免疫熒光或免疫酶染色法評價:
優點:能檢測細胞內的抗原,需要相對較少的細胞,固定後的標本可存放相當長的時間,能顯示病毒抗原的組織學和細胞學分佈特點。免疫酶染色法不需要熒光顯微鏡。工作人員需有豐富的經驗,試驗結果可能受主觀因素的影響。免疫酶染色有可能受內源性酶的影響出現假陽性。間接法的敏感性比直接法的敏感性高,但特異性稍低。#p#副標題#e#
五、HIV RNA基因診斷(檢測病毒遺傳物質,如PCR)
常用方法:PCR、套式或巢式PCR、逆轉錄PCR
基本原理:在體外條件下(至少1對DNA引物,dNTP,緩衝液)DNA聚合酶催化合成與模板DNA互補的新鏈。
意義:病毒核酸陽性一般可作爲診斷病毒感染的依據,但對有些病毒(如鉅細胞病毒,愛滋病毒,乙肝病毒),不能說明宿主感染狀態,如急性、慢性或攜帶。由於PCR的敏感性非高常,實驗條件要求嚴格,根據PCR試驗結果有時尚不能確定病毒或現疾病的關係,該技術在檢測不同標本,診斷不同病毒性疾病中的意義有待進一步評價。
HIV RNA基因PCR檢測評價:優點:敏感、特異,是目前使用的病毒學診斷技術中最敏感的技術方法; 一次可檢測 較大量標本;能檢測出與宿主細胞基因組整合的病毒核酸序列;可用於檢測目前不能或不易分離的病毒。
缺點:對診斷未知病毒的感染無能爲力,被檢測的病毒核酸序列必須已經清楚;需要較多儀器設備,試驗成本較高;有試驗污染的可能性。
發展方向:雜交PCR,定量PCR
艾滋病毒常用檢測方法有很多種,每個醫院和疾控不會完全採用,而是提供幾種艾滋病檢查方法。一般用於艾滋病初篩檢測都是用HIV抗體檢測方法,目前普遍採用的是酶聯免疫法ELISA,化學發光法和膠體金快速法(艾滋病檢測試紙),隨着生活節奏加快,目前艾滋病檢測發展方向也越來越快速了,艾滋病檢測試紙(膠體金)這種高科技新型的檢測方法,得到了廣泛應用,還被用於個人家庭自測,只需要十五分鐘,準確率卻高達99.7%以上,相當於疾控中心專業水平。
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