臨牀血脂測定與應用中存在哪些問題?
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臨牀常規測定的項目主要有血清總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol ,HDL-C),有些還包括載脂蛋白AI(apolipoprotein AI,apoAI)、載脂蛋白B(apolipoprotein B,apoB)和脂蛋白(a)[lipoprotein(a),Lp(a)]。近來《中國成人血脂異常防治指南》[1](以下簡稱《指南》)已正式頒佈實施,但在實際臨牀血脂測定及應用過程中,分析前的變異、血脂水平的劃分、血脂測定的臨牀意義等方面經常存在一些認識上的誤區,需要引起廣大臨牀醫護人員關注。
1 減少分析前變異對血脂測定結果的影響
影響血脂準確測定的因素很多,如標本的來源、測定方法、儀器和試劑等,其中分析前即臨牀實驗室進行測定之前的因素對實驗結果的影響往往被忽視,應特別引起關注[1~3] 。主要包括:⑴生物學因素,如個體間、性別、年齡和種族等。研究發現,TC、TG、HDL-C、LDL-C、apoAI、apoB和Lp(a)的平均生物學變異分別爲6.1%~11%,23%~40%,7%~12%,9.5%,7%~8%,6.5%~10%和8.6%。⑵行爲因素,如飲食、肥胖、吸菸、緊張、飲酒、飲咖啡和鍛鍊等。⑶臨牀因素,如①疾病繼發(內分泌或代謝性疾病、腎臟疾病、肝膽疾病及其他);②藥物誘導(抗高血壓藥,免疫抑制劑及雌激素等)。⑷標本收集與處理,如禁食狀態、血液濃縮、抗凝劑與防腐劑、毛細血管與靜脈血、標本貯存等。
建議採取以下措施減少血脂和脂蛋白測定分析前因素對結果的影響:⑴血脂分析前受試者應處於穩定代謝狀態,至少2周內保持一般飲食習慣和體重穩定。⑵測定前24h內不應進行劇烈體育運動。⑶如血脂檢測異常,在進一步處理前,應在兩月內進行再次或多次測定,但至少要相隔一週。⑷雖然有人認爲TC測定可不用禁食,但應注意飽餐後TC會有所下降;對於TG和其他脂蛋白檢測則需至少禁食12h採血。⑸除臥牀不起者外,採血時一般取坐位,抽血前受試者至少應坐位休息5min。⑹靜脈穿刺過程中止血帶使用不應超過1min。⑺血清或血漿標本均適用於血脂、脂蛋白測定,但現在主張一律用血清。如用EDTA作抗凝劑,分離血漿後應馬上放在2℃~8℃保存,以防組分改變,測定結果需乘以1.03。⑻血清標本應及時測定,如24h內不能完成測定,可密封置於4℃保存1周,-20℃可保存數月,-70℃至少可保存半年;應避免標本反覆凍溶。
2 血脂水平的劃分
血脂水平受多種因素的影響,例如性別、年齡、遺傳或生活方式等,因而不適合確立一個規定的正常值。近20年以來國內外主張以顯著增高冠心病危險的水平作爲血脂水平異常劃分標準,同時也根據危險水平進行干預及制定治療目標。美國膽固醇教育計劃(NCEP)於1988年發表的第一個成人治療計劃(ATPⅠ),概括地提出了一整套治療成人高膽固醇血癥的臨牀措施,經過5年的臨牀實踐對新出現的問題進行了修正和補充,於1993年發佈了ATPⅡ,2001年又發佈了ATPⅢ, 更爲強調理想的血脂水平、HDL的作用和糾正多種心血管病危險因素。與1997年中華心血管病學會組織國內專家於1997年制訂了我國《血脂異常防治建議》(以下簡稱《建議》),ATPIII及其2004年修訂報告的標準相比[4~7],《指南》基於我國人羣的許多流行病學調查結果和大規模臨牀試驗,依此對TC、HDL-C分層切點進行了調整,同時找出與TC分層切點10年發病率相對應的LDL-C水平作爲LDL-C分層切點(表1)[1]。《指南》對TC、TG、LDL-C水平分爲合適範圍、邊緣升高、升高。研究顯示,近10年來,隨着人民生活水平的提高,我國總體人羣的膽固醇水平有所升高,所以血脂分層切點也相應上調。#p#副標題#e#
3 血脂測定的方法學與標準化
3.1血脂測定的方法學
目前國內建議臨牀實驗室採用膽固醇氧化酶-過氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法(CHOD-PAP法)、甘油磷酸氧化酶-過氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法(GPO-PAP法)分別作爲測定血清TC、TG的常規方法[2,8]。一般臨牀實驗室可採用一步GPO-PAP法,有條件的實驗室(如三級以上醫院)應考慮開展遊離甘油(FG)的測定或採用兩步酶法。因爲有些異常或病理情況下如應激反應(腎上腺素激活LPL促進體內脂肪水解),劇烈運動,服用含甘油的藥物如硝酸甘油,靜脈輸入含甘油的營養液,肝素治療,某些嚴重的糖尿病、肝病與腎病,取血器材或試管塞上帶有甘油等時,可見血清FG顯著升高,並給臨牀決策帶來誤導。因此,需要注意血清FG對TG測定結果的影響。
通常需根據各種脂蛋白的密度、顆粒大小、電荷等應用超速離心法、色譜法、電泳法、化學或免疫沉澱法將HDL、LDL與其他脂蛋白分離開,測定HDL或LDL組分中膽固醇含量(HDL-C或LDL-C)。目前建議用雙試劑的直接勻相測定法(homogeneous method)作爲臨牀實驗室測定血清HDL-C、LDL-C的常規方法[2,8] 。可供選擇的測定HDL-C方法主要有:清除法(Clearance method)包括反應促進劑-過氧化物酶清除法(synthetic polymer/detergent HDL-C assay,SPD法)和過氧化氫酶清除法(catalase HDL-C assay,CAT法),PEG修飾酶法(PEG-modified enzyme HDL-C assay,PEGME法),選擇性抑制法(polyanion polymer/ detergent HDL-C assay,PPD法),免疫分離法(immunoseparation method, IS法)包括PEG/抗體包裹法(International Reagents Corp HDL-C assay,IRC法)和抗體免疫分離法(antibody immunoseparation HDL-C assay ,AB法)。以前3類方法爲目前國內臨牀實驗室最常用。可供選擇的測定血清LDL-C的方法主要有:表面活性劑清除法(surfactant LDL-C assay,SUR法),過氧化氫酶清除法(catalase LDL-C assay,CAT法),可溶性反應法(solubilization LDL-C assay,SOL法),保護性試劑法(protecting reagent LDL-C assay,PRO法)和杯芳烴法(calixarene LDL-C assay,CAL法)。以前3類試劑爲國內臨牀實驗室最常用。
目前尚無公認的血清apoAI、apoB 和Lp(a)測定的參考方法。目前建議免疫濁度法[包括免疫散射比濁法(immunonephelometry,INA)和免疫透射比濁法(immunoturbidimetry,ITA)]作爲臨牀實驗室測定血清apoAⅠ、apoB和Lp(a)的常規方法,首選ITA法,其次爲INA法[2,8] 。
3.2 血脂測定的參考系統
目前美國已建立較完整的TC、TG測定的參考系統,其決定性方法都是由美國國家標準與技術研究所(NIST)建立的核素稀釋-質譜法(ID-MS法)。HDL-C、LDL-C目前暫沒有決定性方法和一級參考物質,只有參考方法和二級參考物質。apoAⅠ、apoB和Lp(a)測定的標準化問題非常複雜,目前尚無公認的決定性方法與參考方法,僅CDC建立了一個apoAⅠ測定的HPLC-MS候選決定性方法。表2爲目前國內外公認的血脂與脂蛋白分析參考系統[8] 。
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